介紹下低溫電轉(zhuǎn)儀的工作原理

 

1.核心機(jī)制：電穿孔效應(yīng)

 

這是電轉(zhuǎn)儀的基礎(chǔ)工作原理，分為三個(gè)關(guān)鍵步驟：

 

電場(chǎng)施加：儀器向含有細(xì)胞和外源核酸的電轉(zhuǎn)杯施加短時(shí)、高壓的脈沖電場(chǎng)。電場(chǎng)強(qiáng)度通常在1-30kV/cm，脈沖時(shí)間從微秒到毫秒級(jí)不等，具體參數(shù)需根據(jù)細(xì)胞類(lèi)型調(diào)整。

 

細(xì)胞膜穿孔：高壓電場(chǎng)會(huì)破壞細(xì)胞膜的磷脂雙分子層結(jié)構(gòu)，使其產(chǎn)生瞬時(shí)、可逆的微孔（即“電穿孔”）。這些微孔的直徑約為1-10nm，足以讓外源核酸分子通過(guò)。

 

核酸進(jìn)入與膜修復(fù)：微孔形成后，外源核酸會(huì)在電場(chǎng)力、滲透壓梯度等作用下進(jìn)入細(xì)胞內(nèi)部。脈沖結(jié)束后，細(xì)胞膜的磷脂雙分子層會(huì)通過(guò)自身流動(dòng)性逐漸修復(fù)，微孔閉合，細(xì)胞恢復(fù)正常生理功能，且不會(huì)因穿孔而死亡。

 

2.低溫環(huán)境的作用：保護(hù)細(xì)胞，提升存活率

 

低溫（通常為0-4℃，部分型號(hào)可低至-20℃）是低溫電轉(zhuǎn)儀與常規(guī)電轉(zhuǎn)儀的核心區(qū)別，主要作用有兩點(diǎn)：

 

減少細(xì)胞損傷：低溫能降低細(xì)胞的代謝速率，減緩細(xì)胞膜在高壓電場(chǎng)下的氧化應(yīng)激和熱損傷，避免細(xì)胞膜因過(guò)度破壞而無(wú)法修復(fù)，從而降低細(xì)胞死亡率。

 

提高轉(zhuǎn)化效率：低溫可延長(zhǎng)細(xì)胞膜微孔的開(kāi)放時(shí)間，給外源核酸更多時(shí)間進(jìn)入細(xì)胞；同時(shí)能減少核酸酶的活性，降低外源核酸在進(jìn)入細(xì)胞前被降解的概率，間接提升轉(zhuǎn)化效率。

 

3.關(guān)鍵組件與協(xié)同作用

 

儀器的核心組件通過(guò)協(xié)同工作實(shí)現(xiàn)上述原理，主要包括三部分：

 

低溫控制系統(tǒng)：通過(guò)半導(dǎo)體制冷或液氮冷卻模塊，將電轉(zhuǎn)杯區(qū)域的溫度穩(wěn)定在設(shè)定的低溫范圍，確保整個(gè)電轉(zhuǎn)過(guò)程在低溫環(huán)境中進(jìn)行。

 

脈沖發(fā)生系統(tǒng)：根據(jù)預(yù)設(shè)參數(shù)（如電場(chǎng)強(qiáng)度、脈沖寬度、脈沖次數(shù)）生成精準(zhǔn)的高壓脈沖，避免因脈沖不穩(wěn)定導(dǎo)致細(xì)胞損傷或穿孔不足。

 

電轉(zhuǎn)杯：專(zhuān)用的一次性電轉(zhuǎn)杯（通常為聚丙烯材質(zhì)），內(nèi)壁為導(dǎo)電電極，可將脈沖電場(chǎng)均勻作用于杯內(nèi)的細(xì)胞懸液，保證電場(chǎng)分布一致，提升轉(zhuǎn)化重復(fù)性。

 

為了幫你更直觀理解不同參數(shù)對(duì)電轉(zhuǎn)效果的影響，要不要我?guī)湍阏硪环莩Ｒ?jiàn)細(xì)胞類(lèi)型的低溫電轉(zhuǎn)參數(shù)參考表？表格會(huì)包含細(xì)胞類(lèi)型、推薦電場(chǎng)強(qiáng)度、脈沖時(shí)間及低溫設(shè)定，方便你快速匹配實(shí)驗(yàn)需求。