源自小鼠皮膚組織的細胞類型特異性外泌體的標記、分離和表征

細胞外囊泡是一組參與細胞間通訊的異質(zhì)膜結(jié)合囊泡，在質(zhì)膜（外泌體）或通過內(nèi)吞作用（外泌體）形成。迄今為止，大多數(shù)外泌體研究都集中在體外系統(tǒng)或源自體液的外泌體上，而組織源性的外泌體仍未得到充分探索。在這里，我們提出了一種使用細胞類型特異性啟動子驅(qū)動的報告基因構(gòu)建體的方案，用于靶向標記和隨后從小鼠組織體內(nèi)特定細胞類型中分離外泌體。由于目前主要基于大小、密度或表面標記的分離技術(shù)的局限性，外泌體和外泌體之間的區(qū)分仍然具有挑戰(zhàn)性。為了解決這個問題，我們的方法利用基因工程來特異性標記外泌體，從而能夠從復(fù)雜的異質(zhì)細胞外囊泡生物庫中精確識別和分離它們。通過電子顯微鏡、納米顆粒跟蹤分析、抗體外泌體陣列測定和其他成熟技術(shù)對分離的細胞類型特異性外泌體進行表征。外泌體的標記和分離持續(xù) 2-3 天，旨在讓具有基本實驗室能力的研究人員能夠訪問。該協(xié)議通過能夠從單個細胞類型或多種細胞類型組合中分離出細胞類型特異性外泌體，促進外泌體介導(dǎo)的細胞通訊的研究。該方案中的大多數(shù)實驗都使用了小鼠傷口邊緣皮膚組織，但原則上，該方案也可以應(yīng)用于其他組織以分離外泌體，并根據(jù)需要進行一些修改。這種方法為探索細胞類型特異性外泌體在細胞間通訊中的功能作用開辟了新途徑。

原標題：Labeling, isolation and characterization of cell-type-specific exosomes derived from mouse skin tissue

通訊作者：Chandan K. Sen & Subhadip Ghatak

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